该方法用于标记蛋白质的羧基基团：

1. 将待标记的蛋白溶于150mM NaCl，并调整最终浓度为5-10mg/ml。应确定溶液的pH值介于5-6之间，若有必要，应用稀HCl或稀NaOH溶液调整pH值。
2. 将生物素(长臂)溶于二甲亚砜，并调整终浓度为50mg/ml。
3. 将EDC.HCl溶于150mg/ml的NaCl溶液，并调整终浓度为100mg/ml。
4. 将Sulfo-NHS溶于150mg/ml的NaCl溶液，并调整终浓度为10mg/ml。*
5. 在每1ml的蛋白溶液中，加入20ul生物素(长臂)、100ul EDC.HCl 和100ul Sulfo-NHS。
6. 室温反应3小时至过夜。
7. 凝胶柱或透析法从蛋白中去除未反应的物质。

* 加入Sulfo-NHS有可能导致蛋白生物素标记过量。

注意：以上实验方法未经本公司实验验证，使用者应根据自己的专业知识自行判断或调整。